冬凤兰组织培养与快繁技术研究

分类：论文范文 发表时间：2020-07-14 10:28

　　摘 要 通过探索冬凤兰的组培技术，为冬凤兰的保护和工厂化生产提供技术支撑。以冬凤兰蒴果为原材料，通过不同激素对比，筛选适宜萌芽培养基，并开展了冬凤兰增殖扩繁、生根壮苗、移栽驯化等一系列研究。结果表明：在培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+CM 15%上，萌发时间最早，萌芽率较高；在改良VW培养基上芽分化效果较MS培养基好，芽分化率高，生长势好；在生根培养基VW+IBA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+卡拉胶10 g/L+活性炭0.4 g/L上，生根率达100%；冬凤兰后期需要采用630或650 mL的组培瓶。

　　关键词 冬凤兰 ；VW培养基 ；组织培养 ；快速繁殖

　　冬鳳兰（Cymbidium dayanum Rchb. f.）为附生兰，生于海拔300～1 600 m的疏林中树上或沿溪谷旁岩石壁上。海南主要产地为陵水、琼中、白沙等地。冬凤兰总状花序具5～9朵花；花葶侧生，下垂或外弯；萼片和花瓣白色至奶油黄色，中央有1条粟褐色纵带（从基部到上部3/4处），或偶见整个瓣片充满淡枣红色，唇瓣栗色，但褶片和中央裂片为白色；冬凤兰花期为8～12月份[1]。冬凤兰花期持久，株型优美，具有极大的观赏价值。罗远华等[2]采用灼烧法对冬凤兰蒴果进行灭菌处理，认为此法不用杀菌剂且操作简便，是冬凤兰种子理想的灭菌方法。林泋君[3]以澳大利亚进口的冬凤兰花梗中部为外植体进行试管繁殖。目前针对冬凤兰的研究相对较少。本研究通过常规升汞消毒的方法处理蒴果，将种子无菌播种于MS培养基，通过不同激素诱导出原球茎或芽后，采用改良VW和MS 2种培养基进行原球茎或芽的分化培养，并以改良VW培养基为基础培养基开展扩繁、生根培养研究，探索冬凤兰的组织培养技术，为其工厂化生产提供依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　冬凤兰的蒴果来源于海南省林业科学研究所野生兰花种质资源圃内。试验在海南省林业科学研究所生物技术研究室进行。以八九成熟的自交蒴果为供试材料，从蒴果中收集种子作为外植体进行种子的无菌播种。

　　1.2 方法

　　1.2.1 材料处理

　　取八九成熟的尚未裂开的蒴果为外植体；在超净工作台上，切除蒴果的果梗，用75%酒精棉球擦去表面的脏物后，将其浸泡在75%酒精中30 s，然后用无菌水冲洗2～3次后，再用0.1%升汞溶液消毒15 min，并不时振荡，最后用无菌水冲洗5～6次，每次5 min；将消毒好的蒴果放于无菌接种盘中，用消毒刀将蒴果切开后即可播种。

　　1.2.2 种子萌发培养

　　以MS为种子萌发的基本培养基，分别添加6-BA（0.5、1.0 mg/L）+NAA 0.5 mg/L组合，并添加白糖30 g/L、卡拉胶10 g/L，CM 15%，具体见表1，pH 5.7。endprint

　　2 结果与分析

　　2.1 不同培养基激素组合对种子萌发情况的影响

　　将消毒好的种子分别播种在1～4号诱导培养基上（表1），观察种子萌发情况。结果表明，冬凤兰种子无菌播种大约3～4个月后陆续有芽点出现，随着培养时间的延长球状凸起不断伸长，形成原球茎或芽（图1-A、图1-B）。从表1可看出，采用不同培养基配方，种子的萌芽时间略有不同。当6-BA浓度为1.0 mg/L时，萌发时间相对0.5 mg/L早，添加CM后萌发时间略有缩短。试验结果表明，6-BA对原球茎芽的诱导起主导作用，而且在添加了CM的培养基上萌发时间会缩短。

　　2.2 原球茎的增殖培养

　　冬凤兰的增殖培养采用液体振荡的方式。在100 r/min的转速下振荡培养20 d，切除芽点后的原球茎能快速增殖，增殖率采用称量法进行统计，结果显示增殖率为132.00%。

　　3 讨论

　　无菌播种是兰科植物种子萌发的主要方法，目前多采用MS培养基对冬凤兰进行无菌播种、组织培养研究。本研究利用常规的升汞消毒蒴果的方法，将冬凤兰种子无菌播种于含6-BA+NAA的诱导培养基上，经暗室培养后萌发出白色原球茎，见光后转绿。其中在 MS+6-BA 1.0 g/L+NAA 0.5 g/L+CM 15%的培养基上时，诱导率较高。罗远华等[2]研究表明，冬凤兰种子在花宝1号或MS培养基上培养90 d后萌芽率达98%以上，可添加适量的CM，低浓度的6-BA和NAA有利于冬凤兰种子形成原球茎，这与本研究结论一致。不过罗远华等[2]采用的外植体处理方式为灼烧法，并认为此法无需杀菌剂且操作简便，是冬凤兰种子理想的灭菌方法。

　　为了大量增殖原球茎，本研究采用液体振荡的方式。将原球茎接种入VW液体培养基，添加6-BA 1.0 mg/L，并附加白糖30 g/L、活性炭0.4 g/L，pH 5.7。振荡培养20 d后，增殖率为132.00%。

　　本研究中，将原球茎分别转接入VW和MS 2种分化培養基。在VW培养基中，冬凤兰原球茎分化出芽、根的速度快，分化率高，而且组培苗茎粗，叶片绿。

　　在研究过程中，一般使用传统的220 mL规格的组培瓶，但是冬凤兰生长速度快，叶细长，如果一直采用此规格的瓶，转接的污染率较高，而且当转接不及时、接种苗数多时，会导致根部环绕。后期炼苗移栽时不能形成单株，如果有一株染病或根部腐烂会导致整瓶十余株感染。因此，冬凤兰在壮苗生根阶段应采用630或650 mL规格的组培瓶，可增加其在瓶内生长时间，提高后期瓶苗移栽成活率。

　　参考文献

　　[1] 丁慎言，尹俊梅. 海南岛野生兰花图鉴（第1版）[M]. 北京：中国农业出版社，2015.

　　[2] 罗远华，冷青云，莫 饶，等. 冬凤兰非共生萌发和低温离体保存[J]. 安徽农业科学，2008，36（9）：8 068-8 069.

　　[3] 林泋君. 冬凤兰工厂化快速繁殖和移栽技术研究[J]. 北方园艺，2011（12）：116-117.

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