整体柱固相萃取-高效液相色谱法在线分析水果中

分类：论文范文 发表时间：2021-04-14 09:47

　　摘要:建立了整体柱固相萃取-高效液相色谱/紫外检测在线联用方法并用于水果中氯吡脲的分析测定。考察了萃取溶剂的pH值及其流速、溶剂解吸时间及其流速等因素对氯吡脲萃取率的影响。在优化的条件下，该方法对氯吡脲的富集倍数为214倍，方法的线性范围为0.01～50.00μg/L，检出限为25ng/L，相对标准偏差(ＲSD)为3.9%。黑葡萄、猕猴桃和西瓜等水果中氯吡脲的加标回收率为87.0%～120.7%，ＲSD为0.6%～9.2%。结果表明该方法快速、灵敏，能满足水果中痕量氯吡脲残留分析的要求。

　　关键词:整体柱;固相萃取;高效液相色谱;在线分析;氯吡脲;水果

　　氯吡脲(forchlorfenuron，CPPU)又名调吡脲，化学名称为1-(2-氯-4-吡啶基)-3-苯基脲，是一种广泛应用于农业生产的新型高效植物生长调节剂。由于长期接触CPPU会引起体内蛋白质代谢的紊乱、肺气肿和体形消瘦，欧盟、日本、美国等已对其残留量进行严格限制，不同作物中CPPU最大残留限量(MＲL)为10～100μg/kg［1，2］。我国规定西瓜和黄瓜中CPPU的MＲL为0.1mg/kg，而猕猴桃和葡萄中为0.05mg/kg。目前，国内外对CPPU残留分析的研究主要包括溶剂萃取［3］、固相萃取［4－7］等有效的样品前处理方法，以及灵敏的气(液)相色谱-质谱联用［8］、液相色谱［9］、放射免疫方法［10］等分析方法。由于蔬果中CPPU残留含量通常很低，样品基质和待测组分具有不确定性等因素的影响，其分析检测要求具有精细的操作手段、较高的灵敏度和较强的特异性。现有的离线样品处理与色谱分析等方法存在样品易受污染、损失以及分析灵敏度不高等缺点，难以满足复杂基体中痕量CPPU残留的分析要求。

　　1实验部分

　　1．1仪器、材料和试剂

　　1．1．1仪器LC-10Avp高效液相色谱仪(Shimadzu，日本)，Cary100紫外光谱仪(Varian，美国)，红外光谱仪ThermoScientificNicolet330，Hitachi4300冷场电子扫描显微镜(SEM)(Hitachi，日本)，Diamonsil(TM)钻石C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm，Dikma)，离心机(湖南湘仪离心机仪器有限公司)，超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，冰箱(－20°C，青岛海尔公司)，分析天平(0.1mg，梅特勒-托利多公司)，涡旋机(上海精科仪器有限公司)。

　　1．1．2材料黑葡萄、猕猴桃和西瓜等样品购于中山大学农贸市场。样品新鲜，表面无虫害，冷藏保鲜。对易腐坏的样品需冷冻保存，测定时避免反复解冻。

　　1．2不锈钢管固相萃取整体柱的制备与表征

　　1．2．1不锈钢管的预处理内径1.2mm的不锈钢管先用1mol/LNaOH溶液浸泡1h，再用1mol/L的HCl溶液浸泡1h，然后用超纯水清洗并于120°C干燥1h，待用。

　　1．2．2甲基丙烯酸-二甲基丙烯酸乙二醇酯(MAA-co-EGDMA)整体柱(50mm×1．2mm)的制备参照文献［15］方法，将功能单体MAA47μL、交联剂EGDMA400μL、PEG-6000160mg、致孔剂甲醇1100μL和引发剂AIBN4.5mg混合均匀并超声10min得到预聚液;将预聚液注入已处理的不锈钢管中，用硅橡胶封堵两端并在60°C下反应24h。待反应完成后，将整体柱中的致孔剂及未反应的试剂用甲醇冲洗除去。将整体柱截成50mm左右长度保存待用。

　　2结果与讨论

　　2．1固相萃取整体柱的性能

　　2．1．1固相萃取整体柱的形态表征参照文献［15］方法制备得到的MAA-co-EGD-MA整体柱通过SEM表征其形貌特征，如图1所示。其中图1a为放大60倍时整体柱的截面图，图1b为放大2000倍时整体柱的内部形貌图。从图1可见固相萃取整体柱具有比较疏松的结构，结构较均匀，既有小颗粒与“簇”之间形成的中孔，也有小颗粒之间形成的微孔，保证了整体柱有良好的通透性。

　　2．1．2固相萃取整体柱的通透性以水为流动相，采用流速实验测试制备的整体柱的通透性，得到其流速-压力曲线。结果表明，整体柱的压力(Y)与流动相流速(X)之间具有良好的线性关系，其线性方程为Y=0.3421X+0.3629，相关系数Ｒ2=0.9975。在流动相流速超过2.5mL/min时，整体柱的柱压不超过1.3MPa。当柱压为0.7MPa时，该整体柱的流速可以达到1.0mL/min，说明该不锈钢管整体柱具有很好的通透性。

　　2．2整体柱固相萃取-HPLC在线分析装置

　　采用2个六通阀和整体柱构建了整体柱固相萃取-HPLC在线联用系统，其中六通阀Valve1主要实现样品引入功能，Valve2主要实现在线萃取、解吸和分析进样功能，通过两阀切换实现在线萃取解吸和分析检测(见图2)。在实际样品分析中，先将样品引入Valve1的定量环中，然后通过泵1推动萃取溶剂将样品引入Valve2中的整体柱进行萃取和净化;然后通过泵2将流动相引入整体柱进行解吸进样，完成样品溶液在线萃取、解吸和分析过程。

　　参考文献:

　　［1］ChenWJ，JiaoBN，SuXS，etal．BullEnvironContamTox，2013，90:756

　　［2］ShiXM，JinF，HuangYT，etal．JAgricFoodChem，2012，60:60

　　［3］ShiXM，JinF，HuangYT，etal．FoodIndustryScience＆Technology(史晓梅，金芬，黄玉婷，等．食品工业科技)，2012，33(4):417

　　罗伟强1，2，肖小华1*，杜卓1，李攻科1

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